為了確保提取出的DNA是來自人類而不是細菌之類的其他來源,DNA咨詢委員會的標準9.3要求進行人類特異的DNA定量。只有當DNA提取后,才能進行可靠的定量和定性。對于大多數PCR反應,確定樣本中DNA的量是必要的,因為PCR反應的最佳模板濃度范圍是較窄的,例如,ABI的Profiler PlusTM和CofilerTM復合擴增試劑盒特別要求DNA模板量在1-2.5ng,會得到最優的結果(ABI,1998)。Promega的STR試劑盒也是在同樣的DNA模板濃度范圍才會有最佳的結果(Krenke et a1.,2002)。過量的DNA模板會導致分析中的分裂峰形或者峰高超出分析范圍。過少的DNA模板會導致等位基因“丟失”,因為PCR反應沒能擴增到DNA片段。這種現象也稱隨機效應。
早期經典的DNA定量方法有260nm渡長處的吸光度值和在熒光燈下觀察溴化乙啶染色凝膠上的熒光。不幸的是這些方法不夠靈敏,并且會消耗寶貴而難得的檢材。另外,吸光度法對DNA沒有特異性,蛋白質或提取過程殘留的苯酚會產生假陽性信號,會給出錯誤的過高讀數e為克服這些問題,出現了很多DNA定量的新方法,包括斑點雜交法、熒光微量滴定法和實時定量PCR。更多詳情:http://www.qinzijianding.cn